Биолог.
Москва
biologist.
Moscow
специалист по высокопроизводительному секвенированию.
Москва
specialist in high-throughput sequencing.
Moscow
биолог.
Москва
biologist.
Moscow
Специалист по высокопроизводительному секвенированию.
Москва
specialist in high-throughput sequencing.
Moscow
Специалист по высокопроизводительному секвенированию.
Москва
specialist in high-throughput sequencing.
Moscow
Врач-лабораторный генетик.
Москва
laboratory geneticist.
Moscow
к.б.н., зам. зав. Лаборатории.
Москва
PhD, Deputy Head of Laboratory.
Moscow
к.х.н., зав. лаборатории, директор по научно-исследовательской работе.
Москва
PhD, Head of Laboratory, Director for Research Work.
Moscow
Цель. Оценить допустимость факта прохождения неинвазивного пренатального тестирования (НИПТ) в роли информативного критерия для определения качества плазмы крови (ПК) и внеклеточной дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) (вкДНК) в случае, когда на преаналитическом этапе используются пробирки со стабилизирующим составом, на примере образцов ПК, подвергнутых продолжительному хранению при комнатной температуре (+18о С) и многоцикличному замораживанию-оттаиванию.
Материал и методы. Образцы ПК подвергали 20 циклам замораживания-оттаивания (-80о С/+18о С), 20-дневному хранению при температуре +18о С с промежуточной оценкой состояния вкДНК. Количественный выход оценивали флуорометрически, степень фрагментации — с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени, результаты НИПТ — через высокопроизводительное секвенирование.
Результаты. После многоцикличного замораживания-оттаивания и длительного хранения ПК при комнатной температуре (+18о С) наблюдается снижение целостности вкДНК, уменьшение концентрации вкДНК к 20 циклу оттаивания и тенденция к увеличению концентрации к 20 сут. хранения ПК; несмотря на это, результаты НИПТ исследованных образцов показали высокую степень совпадения с результатами НИПТ референсных образцов.
Заключение. Показано, что один только факт успешного проведения НИПТ не может рассматриваться в качестве надежного и достаточного критерия оценки качества исходной ПК и правильной преаналитики. Это подчеркивает особую важность контроля условий транспортировки и хранения образцов ПК и цельной крови.
Aim. To assess non-invasive prenatal testing (NIPT) as an informative criterion for quality of blood plasma and cell-free deoxyribonucleic acid (DNA) (cfDNA) in the case of using stabilization tubes at the preanalytical phase, in the example of plasma samples subjected to long-term storage at room temperature (+18о С) and multiple freezethaw cycles.
Material and methods. The plasma samples were subjected to 20 freeze-thaw cycles (-80о С/+18о С), 20-day storage at +18о С with an intermediate cfDNA assessment. The quantitative yield was assessed by fluorometry, while the fragmentation and NIPT data — using realtime polymerase chain reaction (PCR) and high-throughput sequencing, respectively.
Results. After multiple freeze-thaw cycles and long-term plasma storage at room temperature (+18о С), a decrease in the integrity and the concentration of cfDNA by the 20th thawing cycle, as well as a tendency to an increase in concentration by 20 days of storage were observed. Despite this, the NIPT results of the studied samples showed a high degree of coincidence with the NIPT data of the reference samples.
Conclusion. The mere fact of successful NIPT cannot be considered as a reliable and sufficient criterion for assessing the quality of initial plasma and correct preanalytics. This emphasizes the particular importance of monitoring the conditions for transporting and storing plasma and whole blood samples.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.