Анна Валерьевна Ноздрачева — к.м.н., с.н.с., зав. лабораторией неспецифической профилактики инфекционных заболеваний.
Ул. Гамалеи, д. 18, 123098, Москва
18 Gamaleya St., Moscow, 123098
Татьяна Анатольевна Семененко — д.м.н., профессор, г.н.с. отдела эпидемиологии.
Ул. Гамалеи, д. 18, 123098, Москва
18 Gamaleya St., Moscow, 123098
Татьяна Владимировна Ермакова — лаборант-исследователь отдела эпидемиологии.
Ул. Гамалеи, д. 18, 123098, Москва
18 Gamaleya St., Moscow, 123098
Людмила Олеговна Ковтун — лаборант-исследователь отдела эпидемиологии.
Ул. Гамалеи, д. 18, 123098, Москва
18 Gamaleya St., Moscow, 123098
Цель. Изучить влияние температурных режимов хранения (-20 и -70 оC) и длительности экспозиции (6 мес. и 6 лет) на сохранность и стабильность специфических антител класса IgG к HBs-антигену вируса гепатита В (анти-HBs IgG) в образцах сывороток крови, хранящихся в биобанке.
Материал и методы. Проведено экспериментальное исследование 180 образцов сыворотки крови. Уровень анти-HBs IgG определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием тест-систем ЗАО "Вектор-Бест" (Россия) в нативных образцах и после хранения в соответствии с двумя сценариями: 1) хранение при -20 и -70 оС в течение 6 мес.; 2) хранение при -70 оС в течение 6 мес. и 6 лет. Статистический анализ проводили с использованием непараметрических методов (критерий Уилкоксона, медиана, интерквартильный размах, коэффициент корреляции Спирмена).
Результаты. В исследовании по первому сценарию установлено, что хранение при -20 оС в течение 6 мес. привело к почти 2-кратному увеличению медианного уровня анти-HBs IgG (с 35,5 (7,8-76,8) до 65,3 (26,0-105,0) МЕ/мл) и появлению 9 ложноположительных результатов. В исследовании по второму сценарию хранение при -70 оС в течение 6 мес. сопровождалось незначительным снижением уровня антител (с 72,5 (27,9-132,0) до 49,3 (4,0-98,4) МЕ/мл) без ложных результатов, а после 6 лет хранения при -70 оС отмечено дальнейшее их снижение до 33,3 (6,15-88,4) МЕ/мл, 2 образца стали ложноотрицательными. Выявлена сильная корреляция между уровнем антител в нативных образцах и после хранения (p=0,97-0,99; p<0,05).
Заключение. Долгосрочное (до 6 лет) хранение образцов сыворотки крови при температуре -70 оС является надежным и не вносит критических искажений в результаты популяционных серологических исследований распространенности анти-HBs IgG. Хранение при -20 оС допустимо лишь краткосрочно, т.к. уже через 6 мес. приводит к появлению ложноположительных результатов и завышению среднего уровня антител, что делает его непригодным для биобанкирования.
Aim. To study the effect of storage temperatures (-20 and -70 оC) and exposure duration (6 months and 6 years) on the preservation and stability of specific anti-hepatitis B virus HBs antigen IgG antibodies (anti-HBs IgG) in serum samples stored in a biobank.
Material and methods. An experimental study was conducted on 180 serum samples. Anti-HBs IgG levels were determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using Vector-Best test systems (Russia) in native samples and after storage according to two following scenarios: 1) storage at -20 and -70 оC for 6 months; 2) storage at -70 оC for 6 months and 6 years. Statistical analysis was performed using nonparametric methods (Wilcoxon test, median, interquartile range, Spearman correlation coefficient).
Results. The study using the first scenario found that storage at -20 оC for 6 months led to an almost 2-fold increase in the median anti-HBs IgG level (from 35,5 (7,8-76,8) to 65,3 (26,0-105,0) IU/ml) and 9 false-positive results. In the second scenario study, storage at -70 оC for 6 months was accompanied by a slight decrease in antibody levels (from 72,5 (27,9-132,0) to 49,3 (4,0-98,4) IU/ml) without false positive results. After 6 years of storage at -70 оC, a further decrease to 33,3 (6,15-88,4) IU/ml was noted, with 2 samples becoming false negative. A strong correlation was found between antibody levels in native samples and after storage (р=0,97-0,99; p<0,05).
Conclusion. Long-term (up to 6 years) storage of serum samples at -70 оC is reliable and does not critically distort the results of population serological studies of anti-HBs IgG prevalence. Storage at -20 оC is only acceptable for short-term storage, as after just 6 months it leads to false-positive results and an overestimation of the average antibody level, making it unsuitable for biobanking.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.